Trüffel sind mykorrhizierend, d.h. sie gehen eine Verbindung mit den Feinwurzeln ihrer Wirtspflanzen ein. In der Regel sind dies Laubbäume und anzunehmen ist eine gegenseitige Symbiose. Die Wirtspflanzen erhalten Mineralsalze und Wasser und im Gegenzug werden die Trüffel mittels Photosynthese versorgt.

Ein wichtiger Faktor für das Wachstum der Trüffel ist aber auch die Qualität resp. der PH-Wert des Bodens. Die meisten Trüffelarten bevorzugen PH-Werte im alkalischen, d.h. kalkhaltigen Bereich. Die geschmacklich besten Trüffel wachsen heute an den Wurzeln (unter der Erde) von Eichen und Baumnussbäumen.

Trüffel können heut aber auch in Plantagen angepflanzt und geerntet werden. Dabei werden junge Eichbäume und Baumnussbäume in einer Plantage gepflanzt und deren Wurzeln mit Trüffelsporen «infisziert». Nach ungefähr 5-6 Jahren wachsen aus den Trüffelsporen die ersten Trüffel, nach 7-8 Jahren können dann ca. 180 kg Trüffel aus 5 Hektaren Land gewonnen werden.

Trüffel wachsen durchschnittlich in einer Tiefe von ca. 10-20 cm unter Oberfläche. Der starke Geruch wird von Wildschweinen und Trüffelhunden gleichermassen durch den Boden hindurch aufgenommen. Wildschweine tragen wesentlich dazu bei, dass Trüffel verbreitet werden indem sie die Trüffel verzehren und die unverdaulichen Trüffelsporen wieder ausscheiden.

In früheren Zeiten wurden Trüffel vor allem mit Trüffelschweinen gesucht. Dies geschieht heute aber nur noch für Touristen, denn beim Ausgraben von Trüffeln richten Trüffelschweine eher Schaden an den Wurzeln der Wirtspflanzen an. Am weitesten verbreitet ist heute die Trüffelsuche mit Trüffelhunden (insbesondere die Rasse «Lagotto Romagnolo» wird dafür eingesetzt). Trüffel-hunde sind im Unterholz agiler und sobald diese zu graben beginnen, kann der Trüffeljäger den Hund bei der Arbeit ablösen. Der Trüffeljäger wird dann sehr vorsichtig die Trüffel freilegen und dabei sicherstellen, dass die Aussenhaut nicht verletzt wird. Nur unversehrte Trüffel erzielen einen guten Preis auf dem Markt.